WB是一种常用的蛋白质分析方法，全称为Western Blotting蛋白印迹法。它可以用来检测特定蛋白在复杂混合物中的存在和相对表达水平。然而，当蛋白质发生修饰时，修饰部位的电荷或空间构像的改变可能会导致蛋白质在SDS-PAGE分离时迁移效率发生改变，可能导致修饰后的蛋白质和未修饰的蛋白质在Western Blotting中呈现不同大小的条带。因此，在解释Western Blotting结果时，需要考虑到蛋白质修饰的影响，以充分评估蛋白质的存在和相对表达水平。
 

蛋白磷酸化

蛋白质磷酸化是一种常见的蛋白质修饰形式，即在蛋白质分子中的特定氨基酸残基（通常是丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸）上添加磷酸基团（PO4）。这种修饰过程是由蛋白激酶催化的，而蛋白磷酸酶则能够将磷酸基团去除。蛋白质磷酸化会改变蛋白质的结构和电荷性质，从而影响其在电泳过程中的迁移效率和凝胶上形成的条带大小。当一个蛋白质发生磷酸化时，其分子量不会真正改变，但磷酸基团的添加会增加蛋白质的负电荷，从而使蛋白质以较慢的速度在凝胶中迁移。因此，磷酸化的蛋白质在WB检测中可能会分子量偏大。

磷酸化依赖性迁移

磷酸化依赖的迁移移动（phosphorylation-dependent mobility shift, PDMS）是指蛋白质在经历磷酸化修饰后，由于电荷改变而在凝胶电泳等实验中出现迁移速率的改变。磷酸化会引起蛋白质电荷状态的改变，从而改变蛋白质在凝胶电泳等分离技术中的电泳迁移效率，导致磷酸化的蛋白质在凝胶中的位置发生移动。这种磷酸化依赖的迁移移动常被用来研究蛋白质的磷酸化状态和功能调控的变化。

 

蛋白糖基化

蛋白糖基化是指糖分子与蛋白质分子之间发生共价键结合的化学修饰过程，可根据连接的糖肽键和寡糖的性质分为特定的几类，包括 N-、O-和 C-端糖基化、脂质糖基化和磷酸化糖基化等。在蛋白质合成的过程中，蛋白质分子可能会与糖分子发生反应，形成糖基化蛋白质。糖基化增加了蛋白质的分子量，因为糖基团的附加会增加蛋白质的总质量，大分子量的糖基化蛋白质需要更长的时间来在凝胶中迁移，从而形成较大的条带。

示例：

蛋白泛素化

蛋白泛素化是指将小蛋白颗粒泛素（Ubiquitin）与其他蛋白质共价结合的修饰过程。泛素化修饰通常会导致泛素共价连接在蛋白质的赖氨酸残基上形成多重泛素链。这种蛋白质泛素化增加了蛋白质的分子量，因为每个泛素分子的质量大约为8.5千达尔顿（kDa）。因此，在SDS-PAGE分析中，相对于未泛素化的蛋白质来说，泛素化蛋白质将显示较大的条带。泛素化修饰还可以影响蛋白质的空间构象和电荷状态。这可能会影响蛋白质在电泳条件下的迁移速度和迁移位置，从而在WB分析中观察到与未泛素化的蛋白质相比较大或相对位置稍有不同的条带。

示例：

蛋白甲基化

蛋白甲基化是一种常见的蛋白质修饰方式，它涉及蛋白质上甲基基团的添加。蛋白甲基化可能会引起蛋白质结构的变化，从而影响蛋白质在电场中的迁移。这可能会导致甲基化蛋白质在WB分析中显示出不同的条带大小或相对位置。因为甲基化修饰可能会改变蛋白质的电荷状态或结构特性，进而影响其在凝胶中的迁移速度。此外，蛋白甲基化还可以影响蛋白质的相互作用、转录调节和信号转导等功能。这些影响也可能在WB分析中表现为不同大小或强度的条带。
 

蛋白乙酰化

蛋白乙酰化是指乙酰基基团的添加到蛋白质上的一种常见蛋白质修饰方式。这种修饰通常发生在赖氨酸残基上，在乙酰辅酶A为底物的乙酰化酶催化下进行。蛋白质乙酰化可能引起蛋白质的空间结构变化，使其在SDS-PAGE电泳条件下显示不同的迁移速率，从而导致条带大小上的变化。其次，乙酰化修饰会增加蛋白质的总质量，进而影响其在凝胶中迁移的速率和位置，从而引起大小上的条带差异。不同蛋白质乙酰化的程度和效应可能有所不同，具体的乙酰化修饰效果可能会因蛋白质的特性和修饰位点而异。
 

蛋白翻译后剪切

蛋白质剪切是一种翻译后修饰事件,它将插入前体蛋白的中间蛋白质肽段剪切出来,并用正常肽键将两侧蛋白质的多肽链连接起来。特定的剪切事件可以改变蛋白质的转录本或表达水平，可能导致某些蛋白质变体的数量增加或减少。这种差异使得某些蛋白质变体在WB分析中显示为特定大小的条带，从而影响结果的观测。

示例：

热门靶标蛋白--检测条带大小与预测不符的原因